慶應義塾研究者情報データベース

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• ライフサイエンス / 構造生物化学

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• イオンチャネル

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• シグナル伝達

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• 核磁気共鳴

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• Peptide Toxins Targeting KV Channels

  Matsumura K., Yokogawa M., Osawa M., Handbook of Experimental Pharmacology, 2021年

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  A number of peptide toxins isolated from animals target potassium ion (K+) channels. Many of them are particularly known to inhibit voltage-gated K+ (KV) channels and are mainly classified into pore-blocking toxins or gating-modifier toxins. Pore-blocking toxins directly bind to the ion permeation pores of KV channels, thereby physically occluding them. In contrast, gating-modifier toxins bind to the voltage-sensor domains of KV channels, modulating their voltage-dependent conformational changes. These peptide toxins are useful molecular tools in revealing the structure-function relationship of KV channels and have potential for novel treatments for diseases related to KV channels. This review focuses on the inhibition mechanism of pore-blocking and gating-modifier toxins that target KV channels.

• Nuclear magnetic resonance approaches for characterizing protein-protein interactions

  Toyama Y., Mase Y., Kano H., Yokogawa M., Osawa M., Shimada I., Methods in Molecular Biology, 2018年

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  The gating of potassium ion (K+) channels is regulated by various kinds of protein-protein interactions (PPIs). Structural investigations of these PPIs provide useful information not only for understanding the gating mechanisms of K+ channels, but also for developing the pharmaceutical compounds targeting K+ channels. Here, we describe a nuclear magnetic resonance spectroscopic method, termed the cross saturation (CS) method, to accurately determine the binding surfaces of protein complexes, and its application to the investigation of the interaction between a G protein-coupled inwardly rectifying K+ channel and a G protein α subunit.

• 【試料分析講座】「蛋白質の分析」

  大澤 匡範今井駿輔、嶋田一夫, 分析化学会（丸善）, 2012年

  担当範囲: NMR・CDスペクトル

• 分子細胞生物学辞典 (第２版)

  大澤 匡範嶋田一夫, 東京化学同人, 2008年

  担当範囲: 「等温滴定型カロリメトリー」,「滴定曲線」

• 実験医学別冊「生命科学のための機器分析実験ハンドブック」

  大澤 匡範嶋田一夫, 羊土社, 2007年

  担当範囲: 「等温滴定型カロリメトリー(ITC)　～熱量測定による相互作用の定量的解析～」

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• NMR ¹H, ¹³C, ¹⁵N backbone resonance assignments of 14-3-3ζ binding region of human FOXO3a (residues 1-284)

  Enomoto S., Nakatsuka S., Kuwayama T., Kawatsu K., Yokogawa M., Osawa M.

  Biomolecular NMR Assignments 18 （ 2 ） 275 - 283 2024年12月

  ISSN  18742718

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  In tumors, mutation in Ras proteins stimulates a signaling cascade through phosphorylation. Downstream of the cascade, many transcription and translation factors are up- or down-regulated by phosphorylation, leading to cancer progression. This phosphorylation cascade is sustained by 14-3-3ζ protein. 14-3-3ζ binds to its client proteins that are Ser/Thr-phosphorylated and prevents their dephosphorylation. One of those transcription factors is FOXO3a, whose transcriptional activity is suppressed in the phosphorylation cascade. FOXO3a binds to specific DNA sequences and activates the transcription of apoptosis-related proteins. In cancer cells, however, FOXO3a is phosphorylated, bound to 14-3-3ζ, and dissociated from the DNA, resulting in FOXO3a inactivation. To elucidate the mechanism of FOXO3a inactivation by the 14-3-3ζ binding, we aim to perform NMR analysis of the interaction between 14-3-3ζ and di-phosphorylated FOXO3a residues 1-284 (dpFOXO3a). Here, we report the backbone resonance assignments of dpFOXO3a, which are transferred from those of the N-terminal domain (NTD) and the DNA-binding domain (DBD) of dpFOXO3a.

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• “NMR 1H, 13C, 15N backbone resonance assignments of 14-3-3ζ binding region of human FOXO3a (residues 1-284)

  Enomoto S., Nakatsuka S., Kuwayama T., Kawatsu K., Yokogawa M., Osawa M.

  Biomolecular NMR Assignments 2024年09月

  研究論文（学術雑誌）, 責任著者, 査読有り

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  In tumors, mutation in Ras proteins stimulates a signaling cascade through phosphorylation. Downstream of the cascade, many transcription and translation factors are up- or down-regulated by phosphorylation, leading to cancer progression. This phosphorylation cascade is sustained by 14-3-3ζ protein. 14-3-3ζ binds to its client proteins that are Ser/Thr-phosphorylated and prevents their dephosphorylation. One of those transcription factors is FOXO3a, whose transcriptional activity is suppressed in the phosphorylation cascade. FOXO3a binds to specific DNA sequences and activates the transcription of apoptosis-related proteins. In cancer cells, however, FOXO3a is phosphorylated, bound to 14-3-3ζ, and dissociated from the DNA, resulting in FOXO3a inactivation. To elucidate the mechanism of FOXO3a inactivation by the 14-3-3ζ binding, we aim to perform NMR analysis of the interaction between 14-3-3ζ and di-phosphorylated FOXO3a residues 1-284 (dpFOXO3a). Here, we report the backbone resonance assignments of dpFOXO3a, which are transferred from those of the N-terminal domain (NTD) and the DNA-binding domain (DBD) of dpFOXO3a.

• Ribonuclease inhibitor and angiogenin system regulates cell type–specific global translation

  Stillinovic M., Sarangdhar M.A., Andina N., Tardivel A., Greub F., Bombaci G., Ansermet C., Zatti M., Saha D., Xiong J., Sagae T., Yokogawa M., Osawa M., Heller M., Keogh A., Keller I., Angelillo-Scherrer A., Allam R.

  Science Advances （American Association for the Advancement of Science）  10 （ 22 ）  2024年05月

  研究論文（学術雑誌）, 共著, 査読有り

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  Translation of mRNAs is a fundamental process that occurs in all cell types of multicellular organisms. Conventionally, it has been considered a default step in gene expression, lacking specific regulation. However, recent studies have documented that certain mRNAs exhibit cell type–specific translation. Despite this, it remains unclear whether global translation is controlled in a cell type–specific manner. By using human cell lines and mouse models, we found that deletion of the ribosome-associated protein ribonuclease inhibitor 1 (RNH1) decreases global translation selectively in hematopoietic-origin cells but not in the non–hematopoietic-origin cells. RNH1-mediated cell type–specific translation is mechanistically linked to angiogenin-induced ribosomal biogenesis. Collectively, this study unravels the existence of cell type–specific global translation regulators and highlights the complex translation regulation in vertebrates.

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• AI-driven molecular generation of not-patented pharmaceutical compounds using world open patent data

  Shimizu Y., Ohta M., Ishida S., Terayama K., Osawa M., Honma T., Ikeda K.

  Journal of Cheminformatics （BioMed Central Ltd）  15 （ 1 ） 120 2023年12月

  研究論文（学術雑誌）, 共著, 査読有り

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  Developing compounds with novel structures is important for the production of new drugs. From an intellectual perspective, confirming the patent status of newly developed compounds is essential, particularly for pharmaceutical companies. The generation of a large number of compounds has been made possible because of the recent advances in artificial intelligence (AI). However, confirming the patent status of these generated molecules has been a challenge because there are no free and easy-to-use tools that can be used to determine the novelty of the generated compounds in terms of patents in a timely manner; additionally, there are no appropriate reference databases for pharmaceutical patents in the world. In this study, two public databases, SureChEMBL and Google Patents Public Datasets, were used to create a reference database of drug-related patented compounds using international patent classification. An exact structure search system was constructed using InChIKey and a relational database system to rapidly search for compounds in the reference database. Because drug-related patented compounds are a good source for generative AI to learn useful chemical structures, they were used as the training data. Furthermore, molecule generation was successfully directed by increasing and decreasing the number of generated patented compounds through incorporation of patent status (i.e., patented or not) into learning. The use of patent status enabled generation of novel molecules with high drug-likeness. The generation using generative AI with patent information would help efficiently propose novel compounds in terms of pharmaceutical patents. Scientific contribution: In this study, a new molecule-generation method that takes into account the patent status of molecules, which has rarely been considered but is an important feature in drug discovery, was developed. The method enables the generation of novel molecules based on pharmaceutical patents with high drug-likeness and will help in the efficient development of effective drug compounds.

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• PoSSuM v.3: A Major Expansion of the PoSSuM Database for Finding Similar Binding Sites of Proteins

  Tsuchiya Y., Yonezawa T., Yamamori Y., Inoura H., Osawa M., Ikeda K., Tomii K.

  Journal of Chemical Information and Modeling （ACS Publications）  63 （ 23 ） 7578 - 7587 2023年11月

  研究論文（学術雑誌）, 共著, 査読有り,  ISSN  15499596

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  Information on structures of protein-ligand complexes, including comparisons of known and putative protein-ligand-binding pockets, is valuable for protein annotation and drug discovery and development. To facilitate biomedical and pharmaceutical research, we developed PoSSuM (https://possum.cbrc.pj.aist.go.jp/PoSSuM/), a database for identifying similar binding pockets in proteins. The current PoSSuM database includes 191 million similar pairs among almost 10 million identified pockets. PoSSuM drug search (PoSSuMds) is a resource for investigating ligand and receptor diversity among a set of pockets that can bind to an approved drug compound. The enhanced PoSSuMds covers pockets associated with both approved drugs and drug candidates in clinical trials from the latest release of ChEMBL. Additionally, we developed two new databases: PoSSuMAg for investigating antibody-antigen interactions and PoSSuMAF to simplify exploring putative pockets in AlphaFold human protein models.

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KOARA（リポジトリ）収録論文等 【 表示 ／ 非表示 】

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• 新型コロナウイルスの感染メカニズムを標的とする革新的新薬の合理的設計・創製

  大澤, 匡範

  福澤諭吉記念慶應義塾学事振興基金事業報告集 （福澤基金運営委員会）  2021年

• 電位依存性イオンチャネルの機能発現メカニズムの解明

  大澤, 匡範

  学事振興資金研究成果実績報告書 （慶應義塾大学）  2020年

• B型肝炎ウイルスの肝細胞侵入および増殖機構の構造生物学的解析

  大澤, 匡範

  科学研究費補助金研究成果報告書 2020年

• 電位センサーを標的とした電位依存性イオンチャネルの機能制御と創薬戦略の構築

  大澤, 匡範

  科学研究費補助金研究成果報告書 2019年

総説・解説等 【 表示 ／ 非表示 】

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• PoSSuM v.3: A Major Expansion of the PoSSuM Database for Finding Similar Binding Sites of Proteins

  Journal of Chemical Information and Modeling  2023年11月

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• Mechanism of hERG inhibition by gating-modifier toxin, APETx1, deduced by functional characterization.

  BMC molecular and cell biology  2021年01月

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  <h4>Background</h4>Human ether-à-go-go-related gene potassium channel 1 (hERG) is a voltage-gated potassium channel, the voltage-sensing domain (VSD) of which is targeted by a gating-modifier toxin, APETx1. APETx1 is a 42-residue peptide toxin of sea anemone Anthopleura elegantissima and inhibits hERG by stabilizing the resting state. A previous study that conducted cysteine-scanning analysis of hERG identified two residues in the S3-S4 region of the VSD that play important roles in hERG inhibition by APETx1. However, mutational analysis of APETx1 could not be conducted as only natural resources have been available until now. Therefore, it remains unclear where and how APETx1 interacts with the VSD in the resting state.<h4>Results</h4>We established a method for preparing recombinant APETx1 and determined the NMR structure of the recombinant APETx1, which is structurally equivalent to the natural product. Electrophysiological analyses using wild type and mutants of APETx1 and hERG revealed that their hydrophobic residues, F15, Y32, F33, and L34, in APETx1, and F508 and I521 in hERG, in addition to a previously reported acidic hERG residue, E518, play key roles in the inhibition of hERG by APETx1. Our hypothetical docking models of the APETx1-VSD complex satisfied the results of mutational analysis.<h4>Conclusions</h4>The present study identified the key residues of APETx1 and hERG that are involved in hERG inhibition by APETx1. These results would help advance understanding of the inhibitory mechanism of APETx1, which could provide a structural basis for designing novel ligands targeting the VSDs of K_V channels.

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研究発表 【 表示 ／ 非表示 】

研究発表 【 表示 ／ 非表示 】

• Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) 担持ビーズを用いた新型コロナウイルス感染症治療薬シードの探索

  江川 奏, 齋藤 駿, 山本 瑞生, 横川 真梨子, 大澤 匡範, 荻 貴之, 荒井 緑

  日本薬学会第145年会, 

  2025年03月

  , 

  ポスター発表

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  新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の原因となるSARS-CoV-2ウイルスは、そのスパイクタンパク質を用いてヒト細胞表面にあるアンジオテンシン変換酵素2（ACE2）受容体と相互作用することで細胞内に侵入する。また、ウイルスに変異が入りやすく、それによる変異株は免疫を逃避することが課題であるが、現状ウイルスの変異に対応できる治療薬は存在しない。したがって、宿主の受容体であるACE2を標的としてスパイクタンパク質との結合を阻害する化合物はウイルスの変異に対応可能な治療薬となり得る。そこで本研究では、当研究室で開発された「標的タンパク質指向型天然物単離法」としてACE2ビーズ法を構築し、沖縄県独自の植物エキスライブラリーからACE2に結合する天然物を探索することを目的とする。

• Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) 担持ビーズを用いた 新型コロナウイルス感染症治療薬シードの探索

  江川 奏, 齋藤 駿, 山本 瑞生, 横川 真梨子, 大澤 匡範, 荻 貴之, 荒井 緑

  第10回 食品薬学シンポジウム , 

  2024年10月

  , 

  口頭発表（一般）

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  新型コロナウイルス感染症（COVID-19）は、2019年暮れに中国・武漢で世界で初めて患者が確認されてから、2ヶ月あまりで世界中に拡散し、世界保健機構（WHO）も2020年3月にパンデミックを宣言した。COVID-19は季節性インフルエンザや新型インフルエンザに比べて感染力が高く1，2)、感染により肺などの呼吸器系だけではなく、特に心臓などの循環器系の合併症や様々な罹患後症状も引き起こす3， 4)。また、COVID-19の原因ウイルスであるSARS-CoV-2には変異が入りやすく、それによる変異株は自然感染やワクチンによって獲得した免疫を逃避することが報告されている5)。現在承認されているSARS-CoV-2の抗ウイルス薬はウイルスを標的としており、ウイルス変異によりその有効性が失われる可能性がある。そのため、未だにSARS-CoV-2の変異に対応できる治療薬の開発が求められている。

• Development of novel anti-HBV drugs based on AI technology using bile acid derivatives to inhibit HBV and NTCP binding

  Okumura A., Ikeda K., Arai J., Muraki Y., Nishimura S., Inden N., Yokogawa M., Yamashita Y., Iguchi Y., Ohashi H., Watashi K., Wakita T., Une M., Osawa M., Ito K.

  International HBV Meeting 2024, 

  2024年09月

  , 

  口頭発表（一般）

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  The development of safe and potent inhibitors of hepatitis B virus (HBV) entry is crucial to prevent new infections and achieve complete virus elimination in HBV carriers. Persistent HBV carriers have partial hepatocyte infection. If entry into uninfected hepatocytes could be completely inhibited, the number of infected cells would decrease over time. We previously reported that INT-767, a bile acid derivative, inhibits HBV entry by acting directly on the preS1 region. Due to safety concerns with INT-767, we aimed to develop a safer anti-HBV agent based on its mechanism of action.
  Methods: A bile acid derivative library, based on the structure of INT-767, was created. We performed a preS1 binding assay to quantitatively evaluate the inhibitory effect of binding between the preS1 region and Sodium-taurocholate co-transporting polypeptide (NTCP) in library compounds. A three-dimensional quantitative structure-activity relationship (3D-QSAR) model was developed to predict anti-HBV activity from the structures of new candidate compounds.
  Results: Analysis of the preS1 binding assay results revealed important structures for anti-HBV activity. Bile acid derivatives inhibiting preS1 and NTCP binding shared a common structure, including INT-767. Constructing a 3D-QSAR model using all assay data enabled more detailed predictions of anti-HBV efficacy. Further studies on various bile acid derivatives revealed novel structural features that enhance anti-HBV efficacy. Synthesizing newly designed lead compounds with these features and conducting in vitro HBV infection models demonstrated anti-HBV effects that exceeded those of existing lead compounds.
  Conclusion: The 3D-QSAR model, constructed from data on the anti-HBV effects of bile acid derivatives, led to the development of novel bile acid derivatives with more potent anti-HBV activity. Future work with these derivatives will collect data on anti-HBV effects and cytotoxicity, enhancing predictive accuracy for further development.

• BTG2によるCaf1依存的ポリA分解の促進機構の解明

  片岡 奈緒，横川 真梨子, 石井 裕一郎, 城 えりか, 高嶋 大翔, 沢崎 綾一, 寒河江 彪流, 尾上 耕一, 星野 真一, 大澤 匡範

  フィジカル・ファーマフォーラム2024, 

  2024年08月

  , 

  口頭発表（一般）

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  B-cell translocation gene2 (BTG2) は、発がん物質やDNA損傷などにより一過的に発現する細胞増殖抑制因子であり、mRNA 3′末端のポリA分解を促進することで翻訳を抑制し、細胞のがん化を抑える。ポリAには複数のポリA結合タンパク質C1 (PABPC1) が結合し、様々なタンパク質をリクルートすることにより翻訳を調節している。BTG2はポリA分解酵素であるCaf1とBTG2-Caf1複合体を形成し、複合体中のBTG2とポリAに結合したPABPC1が相互作用することでCaf1をリクルートし、効率的にポリAを分解すると考えられている (図1)。これまでにPABPC1の4個のRNA認識モチーフ (RRM1/2/3/4) のうち、RRM1とBTG2の結合様式が報告されているが、Caf1とポリAを含まない条件での実験に基づいているため、Caf1が機能している状態の分子間相互作用は分かっていない。そこで本研究では、Caf1やポリA共存下で解析を行いBTG2-Caf1複合体、PABPC1、ポリAの結合様式を明らかにすることで、BTG2によるCaf1依存的ポリA分解の促進機構を解明することを目的とした。

• 新規Keap1-Nrf2タンパク質間相互作用阻害剤とKeap1結合の構造基

  小島行人，石田英子，原田彩佳，米澤朋起，清水祐吾，池田和由，横川真梨子，大澤匡範

  フィジカル・ファーマフォーラム2024, 

  2024年08月

  , 

  口頭発表（一般）

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競争的研究費の研究課題 【 表示 ／ 非表示 】

競争的研究費の研究課題 【 表示 ／ 非表示 】

• 疾病の原因となる生体高分子間相互作用の新たな拮抗メカニズムの解明と創薬戦略

  2024年04月

  -

  2027年03月

  科学研究費助成事業, 大澤 匡範, 基盤研究(B), 補助金,  研究代表者

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  本研究では、「がん関連転写因子FOXO3aをめぐるDNAと14-3-3ζの拮抗メカニズムの解明」、「孤発性ALSの原因タンパク質であるTDP-43の細胞内凝集・沈殿と、RNA結合によるその阻害のメカニズムの解明」を実施例として、複合体の立体構造や解離定数だけからでは説明のつかない効率性の高い拮抗メカニズムを解明することを目的とする。さらに明らかにしたメカニズムに基づき、これらの相互作用系が密接に関わるがんとALSに対する創薬戦略を構築し、新規薬剤の創製に貢献していく。

• B型肝炎ウイルス侵入機構の解明と侵入阻害剤による感染制御

  2022年04月

  -

  2025年03月

  科学研究費助成事業, 伊藤 清顕, 宇根 瑞穂, 大澤 匡範, 梅澤 一夫, 基盤研究(B), 未設定

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  我々は、胆汁酸誘導体の一つであるINT-767がHBVのエンベロープ蛋白質の疎水性領域に結合してHBVの感染を強力に阻害することを発見した（Ito K et al. Hepatology. 2021）。本研究によりHBVの肝細胞内への侵入機構を分子レベルで解明し、胆汁酸誘導体や低分子化合物を利用して、より有効性および安全性が高い新たな感染阻害剤を開発する。HBVと同様に新型コロナウイルスやヒト免疫不全ウイルスなどのエンベロープウイルスもエンベロープ蛋白質の疎水性領域を利用して細胞膜やエンドソーム膜と融合して感染が成立するため、本研究成果は他のエンベロープウイルスに対する治療薬開発にも繋がる。

• 電位依存性イオンチャネルの機能構造と構造間遷移機構の解析による動作機構解明

  2021年04月

  -

  2024年03月

  文部科学省・日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 大澤 匡範、横川 真梨子, 基盤研究(B), 補助金,  研究代表者

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  電位依存性イオンチャネル(VGIC)は、神経伝達や心臓の拍動を担う膜タンパク質であり、創薬の標的としても重要である。VGICは一般に、膜電位に応じた構造変化によりイオン透過ゲートを開閉し、特定のイオンを膜透過させることで膜電位を制御する。しかしながら、これまではその構造遷移メカニズムは不明であった。
  そこで本研究では、リガンドの結合や化学修飾により未解明である機能構造を安定化して構造解析を実現可能とする手法を確立し、その立体構造をX線結晶構造解析あるいは電子顕微鏡により原子レベルで明らかにするとともに、NMRによりそれらの間の構造遷移を解析することにより、VGICの動作メカニズムを解明する。

• B型肝炎ウイルスの肝細胞侵入・増殖機構の構造基盤と立体構造に基づく創薬

  2021年04月

  -

  2024年03月

  慶應義塾大学, 科学研究費助成事業, 横川 真梨子、大澤 匡範, 基盤研究(C), 未設定

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  B型肝炎ウイルス(HBV) 外殻膜の表面抗原タンパク質（LHBs）は、肝細胞への感染時には肝細胞膜上のタンパク質であるNTCPと結合し、宿主内での増殖時にはHBVのキャプシドを形成するタンパク質であるCpと結合する。そこで本研究は、LHBs―NTCPおよびLHBs―Cpの相互作用様式を原子分解能で明らかにすることで、HBVの肝細胞侵入・増殖メカニズムを解明する。明らかにした立体構造に基づくin silicoスクリーニング、および得られた候補化合物のin vitroアッセイを行うことで、これらのタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する中分子合成化合物を探索し、新規作用機序の抗HBV薬を創製する。

• 14-3-3タンパク質によるリン酸化シグナル経路の熱力学的・構造生物学的基盤

  2019年04月

  -

  2021年03月

  文部科学省・日本学術振興会, 科学研究費助成事業, 大澤　匡範, 新学術領域研究（研究課題提案型）, 補助金,  研究代表者

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  多くのがん細胞においては、Ras タンパク質の活性化を起源として、その下流にあるキナーゼを活性化し、そのキナーゼは連鎖的に別のキナーゼをリン酸化・活性化する、というリン酸化シグナルが亢進している。そのシグナルを持続させる機能をもつタンパク質が14-3-3タンパク質である。本研究では、この14-3-3タンパク質がいかにしてリン酸化シグナルを持続させるのかを定量的に、かつ、タンパク質の立体構造の観点より解明することにより、この過程を数理モデル化して理解することを目的としている。このメカニズムが解明できれば、リン酸化シグナルを抑制する革新的な制がん剤の創製につながると考えている。
  多くのがん細胞においては、遺伝子変異によるRas タンパク質の活性化を起源として、その下流にあるキナーゼを活性化し、そのキナーゼは連鎖的に別のキナーゼをリン酸化・活性化する。このようなリン酸化シグナルの連鎖と増幅が、がん細胞の増殖能や浸潤能を高める。　Ser/Thr のリン酸化によるキナーゼの活性化は、14-3-3ζ の結合により持続・亢進し、14-3-3ζ の結合阻害により抑制されることが分かってきた。したがって、がんにおけるリン酸化シグナルの数理モデルを確立するためには、14-3-3ζ と各キナーゼの結合親和性や、その基盤となる複合体の立体構造を明らかにする必要がある。そこで本研究は、14-3-3ζの結合により活性化されるキナーゼや転写因子など（14-3-3ζのclientタンパク質）の全長、あるいは、14-3-3ζとの相互作用部位全体を用いた結合親和性の定量的解析、両者の複合体のX線結晶構造解析を行うことにより、リン酸化シグナルの数理モデルを構築する上での熱力学的・構造生物学的基盤を確立することを目的とする。
  本年度は、14-3-3ζのclientタンパク質のうち、キナーゼ3種類、転写因子2種類の大量発現系を構築し、大腸菌をホストとした大量発現・精製を試みた。これまでに、キナーゼおよび転写因子の各1種類について、大量発現・精製法確立に成功した。キナーゼについてはサイズ排除クロマトグラフィーにより多量体状態の解析を行い、単量体～2量体で存在することが分かった。現在、酵素処理によるリン酸化条件を検討している。転写因子については、これを基質とする別のリン酸化酵素によるリン酸化に成功した。GST融合14-3-3ζを用いたグルタチオンセファロースによるプルダウンアッセイにより、14-3-3ζとリン酸化した転写因子の高親和性結合を確認した。
  当初の計画は、以下の通りであった。
  (1) 14-3-3ζのclient タンパク質の大量調製法の確立、性状解析・活性確認　(2) 14-3-3ζとclient タンパク質全長（相互作用部位全体）の結合親和性の定量解析　(3) 14-3-3ζとclient タンパク質全長（相互作用部位全体）の複合体の結晶化　(4) 14-3-3ζと阻害剤BA およびUTKO1 との相互作用解析、複合体の立体構造解析
  <BR>
  これまでに、(1)については、転写因子およびタンパク質キナーゼの大量調製に成功し、特に転写因子についてはリン酸化方法を確立し、プルダウンアッセイによりリン酸化の有無による14-3-3ζとの結合親和性の変化の検出に成功した。(2)、(3)への取り組みを開始したところである。(4)については、未着手である。
  当初の計画の(2)、(3)については、結晶化に成功し次第、X線結晶構造解析を行う。
  また、大量調製法が確立できていない転写因子とタンパク質リン酸化酵素については、発現条件の検討を行う。

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受賞 【 表示 ／ 非表示 】

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• Best Poster Award

  Masanori Osawa, 2016年07月, The organizing committee of International and Interdisciplinary Symposium 2016, Structural Basis for the Inhibition of Voltage-dependent K+ Channel by Gating Modifier Toxin

  受賞区分： その他

• 長瀬研究振興賞

  2016年04月, 公益財団法人 長瀬科学技術振興財団, 溶液NMRによる、脂質二重膜中での膜蛋白質相互作用の構造生物学的解析を可能とする新規汎用性ナノディスクの開発

  受賞区分： その他

担当授業科目 【 表示 ／ 非表示 】

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• 課題研究（生命機能物理学）

  2024年度

• 演習（生命機能物理学）

  2024年度

• 卒業研究１（薬学科）

  2024年度

• 物理分析学

  2024年度

• 英語演習（薬学科）

  2024年度

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担当経験のある授業科目 【 表示 ／ 非表示 】

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• 卒業研究１（薬学科）

  慶應義塾

  2024年04月

  -

  2025年03月

• 卒業研究（薬科学科）

  慶應義塾

  2024年04月

  -

  2025年03月

• 化学系薬学特論Ⅰ

  慶應義塾

  2024年04月

  -

  2025年03月

• 分析化学

  慶應義塾

  2024年04月

  -

  2025年03月

• 分析・物理化学２

  慶應義塾

  2024年04月

  -

  2025年03月

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